Práctica 7. Determinación de Coombs Indirecto en tubo 02/12/2020

OBJETIVO

• El objetivo de esta práctica es investigar la presencia de anticuerpos irregulares o incompletos en el suero dle paciente enfrentándolos, primeramente, a hematíes específicos tipados y, posteriormente, a la AGH para su detección.

FUNDAMENTOS

• Se detectan anticuerpos específicos de ciertos antígenos que no necesariamente están presentados en los glóbulos rojos del paciente, pero puede estar en glóbulos rojos de otras personas. Si se mezcla suero tomado de un paciente que contiene estos anticuerpos con glóbulos rojos que sí muestran estos antígenos específicos, los glóbulos rojos se van a cubrir con anticuerpo. Una vez cubiertas, las células se van a aglutinar después de una exposición al reactivo de Coombs.

UTILIDAD CLÍNICA

• En el diagnóstico de eritroblastosis fetal, el suero tomado de la madre Rh- no reacciona con su propia sangre, sino con la de su feto Rh+. El suero de la madre, que contiene anticuerpos específicos del factor Rh, se mezcla con glóbulos rojos Rh+. Los anticuerpos del suero se unen a las células. Luego, se agregan anticuerpos antihumanos para aglutinar los glóbulos rojos. Se puede diluir el suero y hacer la prueba repetidas veces, para cuantificar los anticuerpos en el suero.

MATERIALES

Tubos en gradilla

Micropipeta

Pipeta Pasteur

Puntas micropipeta

REACTIVOS

MUESTRA

EQUIPOS

PROCEDIMIENTO

1.  Efectuamos un lavado y una dilución de los hematíes tipados O+ al 5%.
2. Realizamos prueba de Coombs directa sobre los hematíes tipados O+ para comprobar que no existen anticuerpos irregulares sobre ellos.
3. En un tubo de hemólisis depositamos 3 gotas del suero problema.
4. Añadimos al tubo 3 gotas de la suspensión de hematíes tipados al O+ al 5% y agitamos suavemente.
5. Incubamos la mezcla durante 15-30 minutos.
   
6. Lavamos la mezcla con 1 ml de SF.
7. Repetimos este lavado 2 veces más.
8. Al sedimento obtenido con el último lavado añadimos 3 gotas de AGH.
   
9. Centrifugamos a 2500 rpm durante 1 minuto.
   
10. Resuspendemos el sedimento obtenido con el último lavado dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.
    
11. Observamos la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador.

RESULTADOS

• No se observa aglutinación, ya que los hematíes permenacen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.