Práctica 4. Determinación de los grupos sanguíneos ABO y Rh en porta, tubo y tarjeta 23/11/2019

OBJETIVO

  •  El objetivo de esta práctica es determinar los grupos sanguíneos ABO y Rh aplicando diversas técnicas. Lo determinamos en porta, tubo y tarjeta.

FUNDAMENTOS

  • El examen para determinar el grupo sanguíneo se denomina tipificación ABO. La muestra de sangre se mezcla con anticuerpos contra sangre tipo A y tipo B. Entonces la muestra se revisa para ver si los glóbulos sanguíneos se aglutinan o no. Si los glóbulos aglutinan, eso significa que la sangre reaccionó con uno de los anticuerpos.
  • El segundo paso se llama prueba inversa. La parte líquida de la sangre sin células (suero) se mezcla con sangre que se sabe que pertenece al tipo A o al tipo B. Las personas con sangre tipo A tienen anticuerpos anti-B. Las personas que tienen sangre tipo B tienen anticuerpos anti-A. El tipo de sangre O contiene ambos tipos de anticuerpos.
  • La determinación del Rh usa un método similar a la tipificación ABO. Cuando se realiza la determinación del tipo de sangre para ver si el paciente posee el factor Rh en la superficie de sus hematíes, los resultados serán: 
    • Rh+, si tiene proteínas de la superficie celular.
    • Rh-, si no tiene proteínas de la superficie celular.

UTILIDAD CLÍNICA

  • Este tipo de determinaciones son muy importantes, ya que así podemos donar sangre o recibir una transfusión de sangre de manera segura. También se realiza para saber si el paciente posee el factor Rh en la superficie de sus hematíes.
  • Los tipos de sangre principales son:
    • Tipo A.
    • Tipo B.
    • Tipo AB.
    • Tipo O.

DETERMINACIÓN ABO Y RH EN PORTA

MATERIALES
Porta/Tarjeta para la determinación
Reactivos
Alcohol
Lanceta

PROCEDIMIENTO

  1. Desinfectamos la zona del dedo donde vayamos a pinchar con la lanceta, pinchamos y esperamos a que salga un poco se sangre.
  2. Depositamos una gota de sangre en cada uno de los cuadros que tiene la tarjeta.
  3. Añadimos una gota  de cada uno de los reactivos, y con la ayuda de puntas de pipeta homogeneizamos y esperamos para ver si se forma aglutinación.

RESULTADO

  • Como resultado obtenemos: sangre tipo B y Rh +.

DETERMINACIÓN ABO Y RH EN TUBO

MATERIALES
Gradilla con tubos
Reactivos
Pipeta Pasteur
SSF

APARATOS
Centrífuga

MUESTRA
tubo con sangre

PROCEDIMIENTO: LAVADO DE HEMATÍES

  1. Ponemos en un tubo de hemólisis 0,5 ml de sangre.
  2. Llenamos hasta arriba de SF y tapamos con parafilm, agitamos para que se mezcle bien la sangre con el SF.
  3. Centrigufamos durante 5 minutos a 2500 revoluciones por minuto.
  4. Extraemos el sobrenadante con una pipeta Pasteur.
  5. Repetimos los 3 pasos anteriores 2 veces más. 

DILUCIÓN DE HEMATÍES AL 5%

  1. Del sedimento de hematíes obtenido del último lavado y centrifugación, cogemos con una micropipeta 0,1 ml de hematíes y los depositamos en un tubo pequeño.
  2. Añadimos 1,9 ml de SF.

DETERMINACIÓN CELULAR DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y RH

  1. Rotulamos 5 tubos pequeños con A, B, AB, D y CD.
  2. Depositamos en cada uno de ellos 3 o 4 gotas de la dilución de hematíes al 5%.
  3. Añadimos 3 o 4 gotas de suero anti-A, anti-B, anti-D y autocontrol Rh en sus tubos correspondientes.
  4. Agitamos cada uno de los tubos para que se mezclen bien los reactivos con los hematíes.
  5. Esperamos 2 minutos para que se produzca aglutinación.

RESULTADOS 

Tubo D
Tubo AB
  • Utilizamos la lupa con lámpara para ver mejor los resultados. Obtenemos que el paciente pertenece al grupo 0 y Rh +, ya que únicamente se produce aglutinación en el tubo D.

DETERMINACIÓN ABO Y RH EN TARJETA

MATERIALES

ID-Card
Micropipetas y puntas

Tapones para tubos

Gradilla y tubos

Soporte para tarjetas

REACTIVOS


MUESTRA

EQUIPOS

Centrífuga para tarjetas

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA. SUSPENSIÓN HEMATÍES AL 5%

  1. Pipeteamos 0,5 ml de suero salino fisiológico en un tubo limpio.
  2. Agregamos 50 μL de sangre total, mezclamos cuidadosamente.

PROCEDIMIENTO

  1. Retiramos la lámina de sellado sólo de los microtubos que se vayan a utilizar, manteniendo la ID-Tarjeta en posición vertical.
  2. Pipeteamos 50 μL de ID-DiaCell A en el microtubo 5 (A1).
  3. Pipeteamos 50 μL de ID-DiaCell B en el microtubo 6 (B).
  4. Agregamos 50 μL de plasma del paciente en los microtubos 5 y 6. Se recomienda una incubación de 10 minutos a temperatura ambiente.
  5. Agregamos 10 μL de la suspensión de hematíes del paciente en los microtubos 1, 2, 3 y 4.
  6. Centrifugamos la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrifuga.

RESULTADOS

  • Resultado positivo: los hematíes forman una línea roja sobre la superficie del gel, o se reparten a través del gel.
  • Resultado negativo: los hematíes se acumulan al fondo del microtubo.
  • En los microtubos A1 y B, se pueden leer correctamente los resultados, sin embargo, no puede leerse correctamente en los cuatro primeros microtubos. Creemos que esto se debe a que utilizamos una sangre "falsa" que forma parte de un kit que llegó a nuestro laboratorio hace unos años.

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