Práctica 14. Identificación de la actividades de la fosfatasa alcalina en leucocitos 11/02/2020

OBJETIVO

• El objetivo de esta práctica es identificar la actividad de la fosfatasa alcalina en leucocitos.

FUNDAMENTOS

• Para la delimitación citoquímica de una leucemia mieloica crónica de otras enfermedades del tipo de formas mielo-profilerativas, especialmente frente a la mielofibrosis y la policitemia, es adecuada la determinación de la actividades de la fosfatasa alcalina leucocitaria.
• La fosfatasa alcalina leucocitaria cataliza la hidrólisis de ésteres fosfóricos en medio alcalino. El 1-naftol liberado a partir del fosfato de 1-naftilo se acopla con una sal de diazonio para dar un azocolorante pardo, que precipita en la célula de acuerdo con la localización y la actividad de la fosfatasa alcalina en la célula.

UTILIDAD CLÍNICA

• Las peroxidasas son un tipo de enzimas muy extendidas en todo el árbol filogenético de la vida. Pertenecen a la categoría de las oxidorreductasas y según el Comité de Nomenclatura de la Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular se clasifican con los números.
• Es muy útil estudiar los leucocitos, ya que son un tipo de célula sanguínea que se produce en la médula ósea y que se encuentra en la sangre y los tejidos linfáticos. Los leucocitos son parte del sistema inmunitario del cuerpo. Estos ayudan a combatir infecciones y otras enfermedades. Los tipos de leucocitos son los granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), los monocitos y los linfocitos (células T y células B). Con frecuencia, la verificación del número de leucocitos en la sangre es parte de la prueba de recuento sanguíneo completo (RSC), que se puede usar para determinar la presencia de afecciones como infecciones, inflamaciones, alergias y leucemia.

MATERIALES

Cubeta

Pinzas

Micropipeta

Puntas micropipeta

REACTIVOS

MUESTRA

Extensión sanguínea

EQUIPOS

Microscopio

PROCEDIMIENTO

1. En primer lugar, necesitamos frotis de sangre, secados al aire durante mínimo 30 minutos y guardados durante 3 días como máximo.
2. Tras preparar la solución de tinción, comenzamos con la tinción.
3. Introducimos los portaobjetos con la extensión en solución de tinción recién preparada durante 30 minutos.
   
4. Enjuagamos con agua destilada durante 5 minutos.
5. Dejamos secar al aire.
6. Realizamos la contratinción con hemalumbre en solución según Mayer durante 5 minutos.
   
7. Enjuagamos con agua durante 5 minutos.
8. Dejamos secar al aire.
9. Observamos al microscopio.

RESULTADOS

• El producto de reacción pardo se encuentra solamente en las etapas de maduración final de la granulopoyesis. Son evaluados 100 segmentados neutrófilos. En caso de una neutropenia como máximo hasta un 10% de granulocitos con núcleo en banda.
• Observamos.