Práctica 13. Detección de la reacción de la peroxidasa en leucocitos 11/02/2020

OBJETIVO

• El objetivo de esta práctica es detectar la reacción peroxidasa en leucocitos.

FUNDAMENTOS

• La reacción de peroxidasa, en particular la reacción citoquímicamente significativ de mieloproxidasa, sirve de indicador para la presencia de elementos celulares mieloicos. El grado de madurez de los granulocitos en maduración puede ser erstimado esencialmente según la intensidad de la reacción cromática pardo-negruzca.
• Las peroxidasas son catalasas lisosomales que transfieren el hidrógeno desde un donador adecuado a un peróxido. Entonces el donador se oxida y se transforma en un colorante insoluble partdo negruzco, que puede utilizarse como indicador de la correspondiente actividad de peroxidasas.

UTILIDAD CLÍNICA

• Las peroxidasas son un tipo de enzimas muy extendidas en todo el árbol filogenético de la vida. Pertenecen a la categoría de las oxidorreductasas y según el Comité de Nomenclatura de la Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular se clasifican con los números.
• Es muy útil estudiar los leucocitos, ya que son un tipo de célula sanguínea que se produce en la médula ósea y que se encuentra en la sangre y los tejidos linfáticos. Los leucocitos son parte del sistema inmunitario del cuerpo. Estos ayudan a combatir infecciones y otras enfermedades. Los tipos de leucocitos son los granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), los monocitos y los linfocitos (células T y células B). Con frecuencia, la verificación del número de leucocitos en la sangre es parte de la prueba de recuento sanguíneo completo (RSC), que se puede usar para determinar la presencia de afecciones como infecciones, inflamaciones, alergias y leucemia.

MATERIALES

Cubeta

Pinzas

Micropipeta

Puntas micropipeta

REACTIVOS

MUESTRA

Extensión sanguínea

EQUIPOS

Microscopio

PROCEDIMIENTO

1. En primer lugar, necesitamos frotis de sangre, secados al aire durante mínimo 30 minutos y guardados durante 3 días como máximo.
2. Tras preparar la solución de tinción, comenzamos con la tinción.
3. Introducimos los portaobjetos con la extensión en solución de tinción recién preparada durante 10 minutos.
   
4. Enjuagamos con agua destilada.
5. Dejamos secar al aire.
6. Realizamos la contratinción con hemalumbre en solución según Mayer durante 2 minutos.
7. Enjuagamos con agua del grifo.
8. Dejamos secar al aire.
9. Observamos al microscopio.

RESULTADOS

• Como consecuencia de la reacción peroxidasa, todas las células de la serie de maduración neutrófila y especialmente de la eosinófila a partir de los promielocitos son claramente peroxidasa-positivas, si se ven gránulos con tinción pardo-negruzca. Los mieloblastos más maduros también pueden presentar algunos islotes de fermento peroxidasa-positivos en su citoplasma.