Práctica 12. Fibrinógeno

OBJETIVO

• El objetivo de esta práctica es determinar cuantitativamente la cantidad de fibrinógeno presente en una muestra de plasma.

FUNDAMENTOS

• El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombia, se transforma en fibrina. 
• El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcioanl a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación del fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

UTILIDAD CLÍNICA

• El fibrinógeno, proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación.
• La concentración de fibrinógeno se incremente en inflamaciones agudas y embarazo. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

MATERIALES

Tubos en gradilla

Micropipeta

Puntas micropipeta

REACTIVOS

MUESTRA

Plasma

EQUIPOS

Coagulómetro

PROCEDIMIENTO

1. Preparamos una dilución 1/10 de la muestra y los controles en tampón Imidazol:
1. 50 microlitros de muestra
2. 450 microlitros de tampón Imidazol.
2. Preparamos las siguientes diluciones dle calibrador en tampón imidazol:
   
3. A 0,2 ml de cada dilución añadimos 20 microlitros de R3 y atemperatmos a 37ºC durante 4 minutos.
4. Añadimos 0,1 mL de reactivo R1 y cronometramos la formación de los coágulos.
   

RESULTADOS

• Calculamos la media de los duplicados de los tiempos de coagulación. Utilizalos los 5 puntos del calibrador para crear una curva de los tiempos obtenidos frente a los valores de concentración de fibrinógeno de cada dilución del calibrador.
• La concentración de fibrinógeno en la muestra se calcula por interpolacion de su tiempo de coagulación en la curva de calibración.
• La lectura del resultado es 16,8 segundos, que interpolado a la curva, nos da una actividad del 80% más o menos. 
• Para hacer la curva elegimos los siguientes datos:C
• Concentración de 79,74 -- 47 segundos 
• Concentracion de 239 -- 16 segundos 
• Concentracion de 478 -- 11 segundos
• Se encuentra dentro de los valores de referencia: 200-400 mg/dL en plasma humano.